ELISA কিট অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডির কঠিন ধাপ এবং অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডির এনজাইম লেবেলিংয়ের উপর ভিত্তি করে। কঠিন বাহকের পৃষ্ঠে আবদ্ধ অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডি এখনও তার ইমিউনোলজিক্যাল কার্যকলাপ ধরে রাখে এবং অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডি লেবেলযুক্ত এনজাইম তার ইমিউনোলজিক্যাল কার্যকলাপ এবং এনজাইম কার্যকলাপ উভয়ই ধরে রাখে। নির্ণয়ের সময়, পরীক্ষার অধীনে নমুনা (যেটিতে অ্যান্টিবডি বা অ্যান্টিজেন পরিমাপ করা হয়) কঠিন বাহকের পৃষ্ঠে অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডির সাথে প্রতিক্রিয়া দেখায়। কঠিন বাহকের উপর গঠিত অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি কমপ্লেক্স ধোয়ার মাধ্যমে তরলে থাকা অন্যান্য পদার্থ থেকে আলাদা হয়।
এনজাইম-লেবেলযুক্ত অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডিগুলি যোগ করা হয়, যা প্রতিক্রিয়া দ্বারা কঠিন বাহকের সাথেও আবদ্ধ হয়। এই সময়ে, কঠিন পর্যায়ে এনজাইমের পরিমাণ নমুনায় পদার্থের পরিমাণের অনুপাতে থাকে। এনজাইম বিক্রিয়ার সাবস্ট্রেট যোগ করার পর, সাবস্ট্রেটটি এনজাইম দ্বারা অনুঘটক হয়ে রঙিন পণ্যে পরিণত হয়। পণ্যের পরিমাণ সরাসরি নমুনায় পরীক্ষিত পদার্থের পরিমাণের সাথে সম্পর্কিত, তাই রঙের গভীরতা অনুযায়ী গুণগত বা পরিমাণগত বিশ্লেষণ করা যেতে পারে।
এনজাইমগুলির উচ্চ অনুঘটক দক্ষতা পরোক্ষভাবে ইমিউন প্রতিক্রিয়ার ফলাফলকে প্রসারিত করে, যা পরীক্ষাকে অত্যন্ত সংবেদনশীল করে তোলে। ELISA অ্যান্টিজেন নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে, কিন্তু অ্যান্টিবডি নির্ধারণ করতেও ব্যবহার করা যেতে পারে।
ELISA কিটের মৌলিক নীতি
এটি বস্তুকে এনজাইমের সাথে সংযোগ করতে অ্যান্টিজেন এবং অ্যান্টিবডির নির্দিষ্ট প্রতিক্রিয়া ব্যবহার করে এবং তারপর পরিমাণগত নির্ধারণের জন্য এনজাইম এবং সাবস্ট্রেটের মধ্যে রঙের প্রতিক্রিয়া তৈরি করে। পরিমাপের বস্তুটি অ্যান্টিবডি বা অ্যান্টিজেন হতে পারে।
এই নির্ধারণের পদ্ধতিতে তিনটি বিকারক প্রয়োজনীয়:
â সলিড ফেজ অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডি (ইমিউন শোষণকারী)
â¡ এনজাইম লেবেলযুক্ত অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডি (মার্কার)
এনজাইম অ্যাকশনের জন্য সাবস্ট্রেট (কালার ডেভেলপমেন্ট এজেন্ট)
পরিমাপে, অ্যান্টিজেন (অ্যান্টিবডি) প্রথমে কঠিন বাহকের সাথে আবদ্ধ থাকে, কিন্তু তারপরও তার প্রতিরোধ ক্ষমতা বজায় রাখে, এবং তারপরে অ্যান্টিবডি (অ্যান্টিজেন) এবং এনজাইমের একটি সংযোজিত (মার্কার) যোগ করা হয়, যা এখনও তার মূল প্রতিরোধ ক্ষমতা এবং এনজাইমকে ধরে রাখে। কার্যকলাপ যখন কনজুগেট কঠিন বাহকের উপর অ্যান্টিজেনের (অ্যান্টিবডি) সাথে বিক্রিয়া করে, তখন এনজাইমের সংশ্লিষ্ট সাবস্ট্রেট যোগ করা হয়। অর্থাৎ ক্যাটালিটিক হাইড্রোলাইসিস বা REDOX বিক্রিয়া এবং রঙ।
এটি যে রঙের ছায়া তৈরি করে তা পরিমাপ করা অ্যান্টিজেনের (অ্যান্টিবডি) পরিমাণের সমানুপাতিক। এই রঙিন পণ্যটি খালি চোখে, অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ, ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা যেতে পারে, এছাড়াও স্পেকট্রোফটোমিটার (এনজাইম লেবেল যন্ত্র) দ্বারা পরিমাপ করা যেতে পারে। পদ্ধতিটি সহজ, সুবিধাজনক, দ্রুত এবং নির্দিষ্ট।